全血RNA提取试剂盒

产品货号：

WE0513

中文名称：

全血RNA提取试剂盒

英文名称：

RNAtiqu Blood RNA Extraction Kit

产品规格：

50T

发货周期：

1～3天

产品价格：

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本试剂盒适用于从新鲜全血（用柠檬酸盐、EDTA或肝素等抗凝剂处理过的血液样品）中提取总RNA，可以处理多至1.5mL的全血，洗脱得到分子量大于200bp的高纯度RNA，多个样品可以在1小时内同时完成。本制品无需CsCl纯化的超离心步骤和LiCl或乙醇沉淀，不含有苯酚或氯仿等有毒溶剂，经过纯化的RNA有效去除血红素、肝素等酶抑制剂和污染物，可直接用于各种分子生物学常规实验，如RT-PCR、Northern Blot、Dot Blot、体外翻译等实验。

组分	规格
Buffer RBL(10×)	60mL
Buffer RL	35mL
Buffer RW1	40mL
Buffer RW2（concentrate）	11mL
RNase-Free Water	10mL
Spin Columns FL(含收集管)	50套
Spin Columns RM(含收集管)	50套
RNase-Free离心管(1.5mL)	50个

保存：室温

β-巯基乙醇、70%乙醇（用无RNase的水配制）、无水乙醇。

注意事项

预防RNase污染，应注意以下几方面：
- 使用无RNase的塑料制品和枪头，避免交叉污染。
- 玻璃器皿应在使用前于180℃高温下干烤4小时，塑料器皿可在0.5M NaOH中浸泡10分钟，用水彻底冲洗后高压灭菌。
- 配制溶液应使用无RNase的水。
- 操作人员戴一次性口罩和手套，实验过程中要勤换手套。
样品应避免反复冻融，否则影响RNA提取得率和质量。样品在Buffer RL中，可于-70℃保存一个月。
使用前请检查Buffer RL是否出现结晶或者沉淀，可置于56℃水浴重新溶解。Buffer RL在使用前请加入β-巯基乙醇，至终浓度为1%。如1mL Buffer RL加10μL β-巯基乙醇。加入β-巯基乙醇的Buffer RL室温可保存1个月。
第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在Buffer RW2中加入无水乙醇。
本试剂盒不能用于加入抗凝剂的冷冻血液样本RNA的提取。
10×Buffer RBL需在使用前将溶液用无RNase的水进行10倍稀释，稀释后置于2～8℃保存。
若下游实验对DNA非常敏感，建议用不含RNase的DNase I(货号：WE0213)对RNA进行处理。
所有离心步骤如无特殊说明均在室温下进行，且所有操作步骤动作要迅速。

向0.5～1.5mL新鲜的抗凝全血样本中，加入5倍体积的1×Buffer RBL（请于使用前用无RNase的水将10×Buffer RBL稀释10倍），轻轻涡旋或颠倒混匀。冰上孵育10～15分钟，孵育过程中混匀两次。
- 孵育过程中浑浊的悬液会变成透明，证明红细胞被裂解，必要时可以把孵育时间延长至20分钟。
4℃ 2100rpm（~400×g）离心10分钟，小心吸弃上清。
向以上沉淀中加入2倍血液样本体积的1×Buffer RBL（请于使用前用无RNase的水将10×Buffer RBL稀释10倍），轻轻涡旋，充分重悬沉淀。
4℃ 2100rpm离心10分钟，小心并彻底吸弃上清。
- 此步一定要完全去除上清否则影响裂解导致RNA产量下降。
向沉淀中加入Buffer RL（使用前检查是否已经加入β-巯基乙醇），0.5～1.5mL血液样本加入600μL Buffer RL，或小于0.5mL血液样本加入350μL Buffer RL，混匀。
将所得液体转移到已装入收集管的过滤柱（Spin Columns FL）中，12000rpm（~13400×g）离心2分钟，收集滤液，弃掉过滤柱。
向所得滤液中加入1倍体积（600μL或350μL）的70%乙醇（无RNase水配制），混匀。
- 加入乙醇后可能会产生沉淀，不会影响后续实验。
将上步所得溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱（Spin Columns RM）中，若一次不能加完溶液，可分多次转入。12000rpm离心15秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
向吸附柱中加入700μL Buffer RW1，12000rpm离心15秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
可选步骤：如果要进行对微量DNA非常敏感的RNA实验，则用以下步骤替代步骤9。
- 向吸附柱中加入350μL Buffer RW112000rpm离心15秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
- 配制DNase I混合液：取70μL Reaction Buffer和10μL DNase I储存液，轻柔混匀，配制成终体积为80μL的反应液。
  - 以上体系为按照我公司产品不含RNase的DNase I反应体系进行配置，应用其他公司产品请参考相应说明书。
- 向吸附柱中直接加入80μL配制好的DNase I反应液，20～30℃孵育15分钟。
- 向吸附柱中加入350μL Buffer RW1 12000rpm离心15秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
向吸附柱中加入500μL Buffer RW2（使用前检查是否已加入无水乙醇），12000rpm离心15秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
重复步骤10。
12000rpm离心2分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。
- 这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应（酶切、PCR等）。
将吸附柱置于一个新的无RNase离心管中，向吸附柱的中间部位加入30～50μL RNase-Free Water，室温放置1分钟，12000rpm离心1分钟，收集RNA溶液，-70℃保存RNA，防止降解。
- RNase-Free Wate体积不应小于30μL，体积过小影响回收率。
- 如果要提高RNA的产量，可用30～50μL新的RNase-Free Water重复步骤13。
- 如果要提高RNA浓度，可将得到的溶液重新加入到吸附柱中，重复步骤13。

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